传统培养法与PCR-荧光探针法鉴定分枝杆菌的对比研究

doi:10.3969/j.issn.1000-6621.2015.03.014

中国防痨杂志 ›› 2015, Vol. 37 ›› Issue (3): 291-294.doi: 10.3969/j.issn.1000-6621.2015.03.014

传统培养法与PCR-荧光探针法鉴定分枝杆菌的对比研究

张洁邢青王甦民易俊莉杨新宇丁北川苏建荣

100050 首都医科大学附属北京友谊医院检验科［张洁（北京结核病控制研究所在职研究生）、苏建荣］；北京结核病控制研究所中心实验室（邢青、王甦民、易俊莉、杨新宇、丁北川）

收稿日期:2014-08-29 出版日期:2015-03-10 发布日期:2015-04-03
通信作者: 苏建荣 E-mail:youyilab@163.com

Comparative study between the traditional culture method and PCR-fluorescent probe method in the identification of mycobacterium species

ZHANG Jie^*, XING Qing, WANG Su-min, YI Jun-li, YANG Xin-yu, DING Bei-chuan, SU Jian-rong

*Laboratory of Beijing Friendship Hospital affiliated to Capital Medical University(on-the-job postgraduate student of Benjing Research Institute for Tuberculosis Control), Beijing 100050, China

Received:2014-08-29 Online:2015-03-10 Published:2015-04-03
Contact: SU Jian-rong E-mail:youyilab@163.com

摘要/Abstract

摘要： 目的比较传统培养法和PCR-荧光探针法在分枝杆菌的鉴定中有无差异。方法对1552 株分枝杆菌临床分离株同时用传统培养法对硝基苯甲酸（PNB）、噻吩二羧酸肼（TCH）培养基生长试验及PCR-荧光探针法进行鉴定，结果有差别的菌株用16S rRNA基因测序的方法进行确认。结果两种方法非结核分枝杆菌的符合率为75.4％（46/61），结核分枝杆菌复合群的符合率为99.0％（1491/1506），总体符合率为99.0％（1537/1552）。两种方法检测结果不同的15株样本经16S rRNA基因测序进行鉴定，PCR-探针法与16S rRNA结果一致的有14株，另外1株经传代分离纯化后测序结果为结核分枝杆菌和戈登分枝杆菌的混合菌。非结核分枝杆菌对PNB培养基的敏感度为21.7％（13／60），有0.1%（1/1492）的结核分枝杆菌复合群对PNB表现耐受性。对PNB敏感的13株非结核分枝杆菌中，有76.9%（10/13）为堪萨斯分枝杆菌。结论部分非结核分枝杆菌使用PNB-TCH生长试验进行鉴定时会出现误判，而PCR-荧光探针法鉴定结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌的准确性较高。

关键词: 非结核分枝杆菌, 结核分枝杆菌, 细菌学技术, 聚合酶链反应, 对比研究

Abstract: Objective To compare the traditional culture method with PCR-fluorescence probe method for the identification of mycobacteria. Methods One thousand five hundred and fifty two mycobacterial strains from clinical isolates were tested by PNB-TCH growth test and PCR-fluorescent probe method, in which the strains with different testing results were confirmed by 16S rRNA gene sequencing method. Results Between two methods, the coincidence rate of non-tuberculosis mycobacteria (NTM) was 75.4% (46/61), the coincidence rate of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) was 99.0% (1491/1506), and the overall coincidence rate was 99.0% (1537/1552). 15 strains with different testing results were sequenced with 16S rRNA gene, in which 14 were consistent with the results of PCR-probe method, and 1 was isolated and cultured, then confirmed with mixed bacteria of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium Gordon. The sensitivity of PNB culture for NTM was 21.7% (13/60), and the PNB-resistant rate of MTBC was 0.1%（1/1492）. Of 13 PNB-sensitive NTM stains, 10 (76.9%) were Mycobacterium kansasii. Conclusion The identification of part NTM isolates was misjudged using the PNB-TCH growth tests, while the PCR-fluorescent probe method for the identification of MTBC and NTM strains had higher accuracy.

Key words: Nontuberculous mycobacteria, Mycobacterium tuberculosis, Bacteriological techniques, Polymerase chain reaction, Comp study

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ZHANG Jie*, XING Qing, WANG Su-min, YI Jun-li, YANG Xin-yu, DING Bei-chuan, SU Jian-rong. Comparative study between the traditional culture method and PCR-fluorescent probe method in the identification of mycobacterium species[J]. Chinese Journal of Antituberculosis, 2015, 37(3): 291-294. doi: 10.3969/j.issn.1000-6621.2015.03.014

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传统培养法与PCR-荧光探针法鉴定分枝杆菌的对比研究

Comparative study between the traditional culture method and PCR-fluorescent probe method in the identification of mycobacterium species

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